根来寺快秀势六千军势在行进至鸟羽砦前便停下，而伊势贞孝、伊势贞良、三宅国村、细川元贤、秋山直国、加藤将监（伊贺加藤城主）、中野助左卫门等八千军势则是迅速从淀城出发，通过丰后桥后沿着宇治川岸边到达了伏见砦前。伊势贞孝还在伏见砦西南方的奉行所里设置了本阵，并且与幕府军展开对峙。
伏见砦西南方的奉行所南侧就是宇治川，并且通过丰后桥和南岸连接。西南方向通过肥后桥连接淀城方向，通往最西侧的石山本愿寺。而鸟羽、伏见、奉行所的北面则是建筑物最为密集的二条、九条町等。
九月十日，根来寺快秀最先打响第一枪。清晨，他令两千铁炮众朝着鸟羽砦的板屏、大手门齐射。京都鸟羽伏见之战正式打响了。
叛军手中的大量铁炮对鸟羽砦进行了猛烈的火力压制。而固守在鸟羽砦内的居初又次郎、林员清和马场孙次郎三人只能被迫令弓足轻齐射，阻滞了根来寺快秀势的攻势。随后，根来寺快秀势就对鸟羽砦形成了包抄之势。
虽然叛军人数众多，但是在狭窄的街巷之中并不能发挥数量上的优势。而近乎密集的队形使得叛军在进入鸟羽砦周边的街道时遭到了早就埋伏在内的幕府军袭击。不少僧兵和足轻纷纷倒在了冲向京都的道路上。眼看战局渐渐对己方不利的根来寺快秀就急忙令配下的坊主往来右京率本部人马将周边的伏见町、二条町等房屋纷纷点燃。
另一面的伊势贞孝也在攻击伏见砦时遭到了幕府军的迎头痛击。在桃山固守的土田亲重时不时带着少量铁炮足轻在叛军攻击伏见砦时袭击其侧翼，完全无法让叛军能尽全力攻打伏见砦。很快，伊势贞孝就明白了要是无法将桃山夺取就不可能顺利攻下仅有两千军势防御的伏见砦。伊势贞良就被伊势贞孝派去攻打桃山，并且要想方设法将桃山、御香宫两地一并拿下。
伊势贞良率雇佣来的伊贺众加藤将监、中野助左卫门等部一千余军势强渡宇治川并且冒着箭雨和弹雨强行突击至桃山下。而幕府军这面的铁炮足轻们和固守伏见砦内的弓足轻们则是纷纷向着突击过来的叛军连连开火和放箭。伏见周边的街道已被战火所点燃，幕府军以猛烈的火力将周边的平地压制，纵然伊贺众都是能以一敌众、飞檐走壁的好手也逃不过被乱枪打死或乱箭射死的命运。伊势贞良势在突击时遭到了幕府军两段击的攒射，损失惨重。而他最终未能突破幕府军的阵地。
“禀报御馆殿，敌军在鸟羽、伏见的攻势已被我军击退！”中西次郎坊瞬间出现在了谦信所在的龙云寺内。
“很好。”谦信缓缓起身。
“管领殿，请下决断！”明智光秀、上野信孝（足利义辉侧近，奉公众）、大馆晴光（足利义晴的义兄弟，足利义辉侧近）等人纷纷起身说道。
“伊势伊势守贞孝，深受幕府之恩却不知回报，反而勾结各地贼人妄图颠覆幕府，企图另立将军，真是可笑！要击败忘恩负义的伊势贞孝就是现在！”谦信对着面前众多幕府的奉公众和坂本众等说道。
“噢！”大广间内一阵高呼。
“别珍惜自己的性命，舍生则生，惧死必死。武运在天，铠甲在前，功勋在脚下！”
“噢！”接着又是一阵高呼。
随即在龙云寺的幕府军五千军势便行动起来，他们的目标不是根来寺快秀的根来众而是在伏见砦南部奉行所内的伊势贞孝。
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